產(chǎn)地 | 進口、國產(chǎn) |
品牌 | 帛科 |
貨號 | BKP3795 |
用途 | 公司產(chǎn)品僅用物科研 |
包裝規(guī)格 | 50次 |
純度 | % |
CAS編號 | |
是否進口 | 是 |
PCR實驗方法步驟:
方法
1:在冰浴中,按以下次序?qū)⒏鞒煞旨尤胍粺o菌0.5ml離心管中。
10×PCR buffer
5 μl dNTP mix (2mM)
4 μl 引物1(10pM)
2 μl 引物2(10pM)
2 μl Taq酶 (2U/μl)
1 μl DNA模板(50ng-1μg/μl)
1 μl 加ddH2O至 50 μl
視PCR儀有無熱蓋,不加或添加石蠟油。
2:調(diào)整好反應(yīng)程序。將上述混合液稍加離心,立即置PCR儀上,執(zhí)行擴增。一般:在93℃預(yù)變性3-5min,進入循環(huán)擴增階段:93℃ 40s → 58℃ 30s → 72℃ 60s,循環(huán)30-35次,在72℃ 保7min。
3:伴放線放線桿菌探針法熒光定量PCR試劑盒結(jié)束反應(yīng),PCR產(chǎn)物放置于4℃待電泳檢測或-20℃長期保存。
4:PCR的電泳檢測:如在反應(yīng)管中加有石蠟油,需用100μ進行抽提反應(yīng)混合液,以除去石蠟油;否則,直接取5-10μl電泳檢測。
產(chǎn)品名稱 | 英文名稱 | 貨號 |
庚型肝炎病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng) | Hepatitis G Virus(HGV)PCR | BKP3795 |
技術(shù)服務(wù)內(nèi)容:
實驗步驟包括RNA提取、反轉(zhuǎn)錄、PCR和瓊脂糖凝膠電泳,以軟件分析電泳條帶的灰度值(IOD值),通過與內(nèi)參基因的灰度值比較,判斷目的mRNA的相對表達量。
特點優(yōu)勢:
1. 特異性:庚型肝炎病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng)使用的引物均經(jīng)過詳盡的生物信息學(xué)分析,經(jīng)過GenBank及自建龐大數(shù)據(jù)庫的比對,確保所用的每一條引物均為種屬或血清型特異的基因序列區(qū)段,可實現(xiàn)對細菌種屬及血清型的特異檢測,特異性均達到100%。
2. 重現(xiàn)性:該系列所有產(chǎn)品均經(jīng)過大量實驗菌株的驗證,重現(xiàn)性為100%。
3. 靈敏性:該系列產(chǎn)品可實現(xiàn)對檢測菌的高靈敏檢測,當(dāng)樣品中細菌的濃度達到103cfu/ml時,可實現(xiàn)對其的直接檢測,無需繁瑣的增菌過程。
4. 實用性:檢測范圍廣,涵蓋了對人體危害較為嚴重的17種及腸道致病菌,可實現(xiàn)對臨床樣品及其他環(huán)境取樣的快速檢測,整個檢測過程為3-4個小時。
5. 優(yōu)勢1:序列資源豐富,除GenBank公布的序列外,公司還進行了大量菌株的序列破譯,從理論上保證所選引物具有良好的保守性和特異性。6. 優(yōu)勢2:該系列試劑盒均經(jīng)過大量的保守性及特異性實驗驗證,憑借公司擁有的豐富的菌種資源,每一種檢測試劑盒均經(jīng)過了20余種標準菌株和臨床菌株的保守性驗證及40余種近緣標準菌株和臨床菌株的特異性驗證,確保在使用過程中不會出現(xiàn)任何的假陽性及假陰性報告結(jié)果。本產(chǎn)品只適用于科研,不能用于臨床診斷。
HA Others H9N2 甲型 H9N2 (A/Guinea fowl/Hong Kong/WF10/99) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細胞裂解液 (陽性對照) TERRIFICBROTH,POWDER*肉湯, 粉末生物技術(shù)級100GRT
HL-60, 人早幼粒細胞鉬醋銨;四水合鉬醋銨;七鉬醋銨;仲鉬醋銨 cMMoniuM hqptcMolybdctq tqtrchydrctq;Molybdic ccid cMMoniuM sclt tqtrchydrctq;cMMoniuM hqptcMolybctq;HqxccMMoniuM hqptcMolybdctq tqtrchydrctq 1024-82-
IL17RA Others Mouse 小鼠 IL17RA / IL17R / CD217 人細胞裂解液 (陽性對照) H-Glu-PNAL-谷?;?/span>-4-硝基本胺100毫克BR,98%
EB病毒轉(zhuǎn)化的人B細胞(傣族);KM9405胞嘧啶25克
GP2-293Luc細胞,人胚腎上皮包裝細胞 綠猴恒河猴腎細胞,LLC-MK2細胞 CL-0348Hce-8693(人盲腸腺癌細胞(未分化))5×106cells/瓶×2(豬膽鹽)
大鼠腎小球內(nèi)皮細胞完全培養(yǎng)基 100mL雙甘氨二肽Gly-Gly質(zhì)量規(guī)格:>99%,BR
PC 61 5.3 [PC 61; PC 61.5.3]雜交瘤細胞CD25 PC 615.3 [PC 61; PC 61.5.3] hybridoma cell line CD25 DMEM+10% Hyclone 滅活血清重組人胰島素Human recombinant Insulin質(zhì)量規(guī)格:效價測定
IGFBP7 Protein Human 重組人 IGFBP7 / IBP-7 蛋白 (His 標簽)人胰島素Human Insulin質(zhì)量規(guī)格:測定用
HAN(人羊膜細胞) 5×106cells/瓶×2 雪旺細胞培養(yǎng)基SCM硝酸舍他康唑Sertaconazole nitrate質(zhì)量規(guī)格:>98%,BR
腎小球內(nèi)皮細胞Many types of cells包裝:5 × 105方(1ml)醋酸依降鈣素 Elcatonin Acetate質(zhì)量規(guī)格:BR
庚型肝炎病毒PCR檢測試劑盒供應(yīng)ME-180 人子宮頸表皮癌細胞4-(己氧基)苯(>98.0%(GC))4-(Hexyloxy)benzaldehyde質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)
NCI-H292人細胞(結(jié)轉(zhuǎn)移) NCI-H292 human lung cancer cells (lymph node metastasis) RPMI-1640(GIBCO)+10%FBS4-庚氧基苯(>98.0%(GC)(T))4-Heptyloxybenzaldehyde質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(GC)(T)
KITLG Protein Mouse 重組小鼠 SCF / C-kit ligand 蛋白 (His 標簽)4-差向-地美環(huán)素4-epi-Demeclocycline質(zhì)量規(guī)格:美國進口
人葡萄膜色素細胞;UM 人氣管平滑肌細胞完全培養(yǎng)基 100mL頭孢喹諾Cefquinome質(zhì)量規(guī)格:美國進口
急性T細胞細胞;TALL-104頭孢噻呋Ceftiofur質(zhì)量規(guī)格:美國進口
IFNAR2 Others Human 人 IFNAR2 / IFNABR 人細胞裂解液 (陽性對照) 2,3,6,7,10,11-六甲氧基三亞苯(>95.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(GC)2,3,6,7,10,11-Hexamethoxytriphenylene
人細胞;Hela2,3,6,7,10,11-六羥基三亞苯水合物(>95.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:>95.0%(HPLC)2,3,6,7,10,11-Hexahydroxytriphenylene Hydrate
APOL1 Others Human 人 APOL1 / apolipoprotein L1 桿狀病毒-昆蟲細胞裂解液 (陽性對照) 2,3,6,7,10,11-六乙酰氧基三亞苯(>98.0%(HPLC))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(HPLC)2,3,6,7,10,11-Hexaacetoxytriphenylene
CL-0421RAG(小鼠腎腺癌細胞)5×106cells/瓶×22,3,6,7,10,11-六溴三亞苯(>98.0%(T))質(zhì)量規(guī)格:>98.0%(T)2,3,6,7,10,11-Hexabromotriphenylene
人羊膜上皮細胞 雙位點HC-KIT受體細胞株,DMF7細胞 BLO-11(小鼠骨骼成纖維細胞)1-溴-4-正辛基苯(>90.0%(GC))質(zhì)量規(guī)格:>90.0%(GC)1-Bromo-4-n-octylbenzene
反應(yīng)五要素:
參加PCR反應(yīng)的物質(zhì)主要有五種即引物、酶、dNTP、模板和Mg2+
引物:引物是PCR特異性反應(yīng)的關(guān)鍵,PCR 產(chǎn)物的特異性取決于引物與模板DNA互補的程度。理論上,只要知道任何一段模板DNA序列, 就能按其設(shè)計互補的寡核苷酸鏈做引物,利用PCR就可將模板DNA在體外大量擴增。設(shè)計引物應(yīng)遵循以下原則:
①引物長度: 15-30bp,常用為20bp左右。
②引物擴增跨度: 以200-500bp為宜,特定條件下可擴增長至10kb的片段。
③引物堿基:G+C含量以40-60%為宜,G+C太少擴增效果不佳,G+C過多易出現(xiàn)非特異條帶。ATGC*隨機分布,避免5個以上的嘌呤或嘧啶核苷酸的成串排列。
④避免引物內(nèi)部出現(xiàn)二級結(jié)構(gòu),避免兩條引物間互補,特別是3'端的互補,否則會形成引物二聚體,產(chǎn)生非特異的擴增條帶。
⑤引物3'端的堿基,特別是最末及倒數(shù)*個堿基,應(yīng)嚴格要求配對,以避免因末端堿基不配對而導(dǎo)致PCR失敗。
⑥引物中有或能加上合適的酶切位點, 被擴增的靶序列*有適宜的酶切位點, 這對酶切分析或分子克隆很有好處。
⑦引物的特異性:引物應(yīng)與核酸序列數(shù)據(jù)庫的其它序列無明顯同源性。
引物量:每條引物的濃度0.1~1umol或10~100pmol,以*引物量產(chǎn)生所需要的結(jié)果為好,引物濃度偏高會引起錯配和非特異性擴增,且可增加引物之間形成二聚體的機會。